دانلود تحقیق آشنایی با وسایل آزمایشگاهی

آشنایی با وسایل آزمایشگاهی :

آنس ( فلیدوپلاتین ) : که به دو نوع می باشد نوک تیز و حلقه ای که برای انواع کشت ها در محیط های مختلف به کار می رود .

پیست اتوماتیک : پیستی بسیار حساس و دقیق می باشد که دارای تنظیمی در قسمت فوقانی خود می باشد که می تواند از 1 سی سی تا 1000 سی سی تنظیم شود .  این دستگاه دارای قسمت های پلاستیکی می باشد که برای برداشتن مواد از آنها استفاده می شود و یکبار مصرف می باشند . این اجزای پلاستیکی سر سمپلر می باشند .

فور : دستگاهی برای استریل کردن

انکوباتور ( گرم خانه ) : که بعد از کشت برخی محیط ها را برای اینکه در محیط مناسب خود قرار گیرند در آن قرار می دهند . دمای آن قابل تنظیم بوده همچنین می توان زمان را نیز برای آن تعریف نمود .

اتوکلاو : دستگاهی شبیه به یک زود پز بزرگ می باشد که برای استریل کردن از آن استفاده می شود.

استریلیزاسیون :

روندی است که در طی آن همه اشکال میکروبی را اعم از اشکال فعال و اسپورها را از بین می بریم و آن ابزار و یا آن ماده مورد استفاده را عاری از هر گونه میکروب می کند .

استریلیزاسیون به دو صورت خشک و رطوبی انجام می شود .

Stril: ( Dry – wet – filter )

روش های کشت باکتری :

هدف از کشت باکتری :

باکتری را بتوانیم جدا ایزوله کنیم ( خالص کنیم ) مثلا حیوانی که مبتلا است ( بیمار است ) می توانیم عوامل بیماریزا را از او جدا کنیم و با شناسایی عوامل بیماریزا پی به ماهیت بیماری ببریم .

از کشت باکتریایی کمک می گیریم برای درمان بیماری ( تست آنتی بیوگرام ) که در این تست ها باکتری خالص شده را در اختیار داریم . می توانیم داروهای متعدد را روی آن آزمایش کنیم و به هر کدام از داروها جواب داد در مورد انسان و یا دام استفاده کنیم .

تهیه واکسن ها : کشت های خالص را بدست می آوریم بعد آنتی ژنهای آن باکتری ها را جدا می کنیم و از آنها واکسن تهیه می کنیم .

محیط های کشت :

الف : محیط کشت مایع : (Broth) آبگوشت ، مثال انواع محلولهای قندی مثل گلوکزبرات .

ب : محیط های جامد : Agar :

یک پلی ساکارید است . پلی ساکارید کمپلکسی است که باکتری ها می توانند آن را تجزیه کنند . ( سفت کننده است ) . ما به طور معمولی محیط های جامد را داخل پلیت تهیه می کنیم ( یک تعدادی داخل لوله ) محیط های مایع همیشه داخل لوله تهیه می شوند .

ج : حالت نیمه جامد :

آگار را به میزان کم دارد حالت ژل مانند . از این محیط ها عمدتا جهت بررسی فاکتور حرکت در باکتریها استفاده می کنیم و در لوله هم تهیه می شوند .

روش های کشت :

روش شعاعی :

روش کشت T:

3- روش کشت ممتد :

4-کشت یک چهارم (4/1)

روش های کشت در لوله :

نوترینت آگار زرد رنگ طلایی می باشد .

چهار محیط را ما در این آزمایش کشت دادیم .

در یک پلیت که زرد رنگ بود ( نوترینت آگار ) از محیط e3 کشت دادیم .

در مایع قندی که قرمز روشن بود از محیط e1 کشت دادیم .

در SIM که زرد روشن بود از محیط e3 کشت دادیم .

در TSI که نارنجی رنگ بود از محیط e2 کشت دادیم .

رنگ آمیزی باکتریها :

Whole colony : اشکال کلونی :

Pnctiform:                               Circular:                    

                    ☼☼☼☼☼☼                     ЖЖЖЖ

Filamentus: ☼☼☼☼☼☼      Rhizoid: ǼĦĦΨΨ                   Ivregular :

                   ☼☼☼☼☼☼

Flat:                            Elevation: (شکل جانبی , چقدر بالا رفته)   Raised:

Convex:                       Pulvinate:                                Umbonate:

Smooth: صاف               Roaph: خشن                Drycorn powdery: حالت پودری

Sarface appearance: جنس

انواع رنگ آمیزی :

ساده

تفریقی

در حالت تفریقی از دو رنگ می توان استفاده نمود که حالت کنتراست داشته باشند . اما در رنگ آمیزی ساده از یک رنگ استفاده می شود .

هدف ما از رنگ آمیزی تشخیص گران مثبت یا گران منفی بودن باکتری است .

رنگ آمیزی ساده را با متیلن بلو انجام دادیم .

نتایج آزمایش کشت باکتری :

کشت در پلیت به صورت کلونی تک دیده می شود . در مایع کشت بسیار عالی و به رنگ نارنجی در آمده است . سطح مورب به صورت خوب کشت شده و رنگ آن زرد تیره ( رنگ روغن مایع ) شده است که قبلا قرمز آجری بود . در SIM مسیر فرو رفتن آنس به صورت ابر مانند می باشد .

Plate : Raised & Circular & Smooth

تهیه اسمیر میکروبی و رنگ آمیزی آن :

در واقع ما در این تکنیک باکتریهایی را که می خواهیم در زیر میکروسکوپ با اهداف مختلفی بررسی کنیم ابتدا بایستی که یک گسترش را از آنها تهیه کنیم به این صورت که باید یک لایه نازکی از این جمعیت باکتریایی تهیه کنیم بعدا اینها را تثبیت می کنیم روی لام و پس از رنگ آمیزی زیر میکروسکوپ بررسی می کنیم . برای شروع کار از یک لام تمیز استفاده می کنیم . ابتدا از آب مقطر یک مقدار بر می داریم خیلی کم روی لام می گذاریم بعد نوک آنس را آغشته می کنیم و در داخل لام کاملا پخش می کنیم بعد در فضای آزمایشگاه باید خشک شده و برای تثبیت از روی شعله رد می کنیم . تا مدتی که دست را نسوزاند . مایع را نیز بعد از استریل کردن آنس در محیط مایع فرو می بریم و بعد یک یا دو بار در محیط فرو می بریم و بعد روی لام جدید می ریزیم .

رنگ آمیزی گرم :

در روش رنگ آمیزی گرم ما از سه رنگ استفاده می کنیم که 2 تا از این رنگها نقش مستقیم در این رنگ آمیزی دارند و براساس  اینکه باکتری ها چه رنگی را به خودشان خواهند گرفت می توان آنها را بعدا دسته بندی کنیم به گرم + و گرم _ ای روش برای اولین بار در سال 1884 توسط کریستین گرند ابدا‌ء شد و به مرور زمان یک سری تغییراتی در آن به وجود آمد ولی به طور کلی اساس کار تفاوت چندانی نمی کرد .

اساس کار:

ما ابتدا از یک رنگی استفاده می کنیم بنام رنگ اولیه Primary stain که با این رنگ آمیزی هر دو گروه رنگ خواهند گرفت .

از یک ترکیب رنگ بر استفاده می کنیم ( De colorization agent ) .

رنگی که باعث ایجاد کنتراست می شود . (Coanterstain)